Quanti ml di spore in 10 ml di CL?

[Freesty]

La domanda è semplice, quanti ml di spore in 10 ml di CL per far più getti(esempio più pacchi di riso x Uncle Ben)

Ho capito come utilizzare la CL già pronta, ma se voglio ottenere più getti insieme come faccio a regolarmi con le spore per non rovinare tutto.
Sopratutto se mischio con la CL non so quante spore sto iniettando, quindi non so magari abbondo

[asklepios]

Se ti riferisci alla coltura liquida, te la sconsiglio vivamente. Bastano un paio di batteri nelle tua soluzione di spore per contaminare totalmente la coltura liquida in un paio di giorni. Sai quando si dice che non bisogna esagerare con la soluzione di spore in quanto un eccesso di liquido favorisce la crescita batterica? Immaginati con la coltura liquida. La coltura liquida idealmente (in assenza di antibiotici) va inoculata con micelio che su agar e con tecnica sterile è stato separato da ogni possibile contaminante. Se non hai a disposizione agar e un inoculante pulito (quindi NON soluzione di spore) il mio consiglio è di stare alla larga dalla coltura liquida, poi fai come vuoi. Conta che per ogni inoculazione con una siringa di spore bastano poche gocce, quindi 5/10 mL di soluzione di spore ti permettono di fare una grande quantità di inoculazioni, senza bisogno di espandere a coltura liquida.

[Freesty]

Ho visto con gente che le metteva senza problemi. Conosco l’agar ma l’ho sempre evitata per mancanza di materiale e complessità. Dici che anche se ci provo con la CL, quasi sicuro si contamina?
Buh mi verrebbe più facile comprare le cose ma non posso buttare stipendi interi
Magari mi sbaglio io é l’agar é più semplice del previsto buh

[Viaggiatore]

Ho visto con gente che le metteva senza problemi. Conosco l’agar ma l’ho sempre evitata per mancanza di materiale e complessità. Dici che anche se ci provo con la CL, quasi sicuro si contamina?
Buh mi verrebbe più facile comprare le cose ma non posso buttare stipendi interi
Magari mi sbaglio io é l’agar é più semplice del previsto buh

Io in genere compro le impronte spirali e produco le mie siringhe di spore. Inoculo direttamente il riso integrale con quelle. Negli ultimi due tentativi si è contaminato un contenitore su quattro.

[asklepios]

Ho visto con gente che le metteva senza problemi. Conosco l’agar ma l’ho sempre evitata per mancanza di materiale e complessità. Dici che anche se ci provo con la CL, quasi sicuro si contamina?
Buh mi verrebbe più facile comprare le cose ma non posso buttare stipendi interi
Magari mi sbaglio io é l’agar é più semplice del previsto buh

L'agar non ha nulla di particolarmente difficile, richiede solo tempo e pazienza. L'investimento iniziale può essere abbastanza contenuto a seconda di che tipo di attrezzatura compri e dove la compri.
Quella della coltura liquida è una semplice questione di rischio e beneficio. Il rischio, con ogni passaggio in più, è quello di creare contaminazione. La coltura liquida per i motivi che ti ho detto è particolarmente rischiosa in quel senso. In più se si contamina la coltura liquida e non te ne accorgi, perderai 100% di quello che inoculi successivamente. Quali sono i benefici? Maggiore quantità di inoculante e colonizzazione marginalmente più rapida. Di maggiore quantità di inoculante non te ne fai niente se hai una siringa di spore, anche perché senza avere a disposizione l'agar le siringhe di spore si conservano solo per un certo tanto (non ha senso conservarle indefinitamente). La velocità di colonizzazione è un guadagno secondario se poi devi ricominciare tutto da capo. Vedi tu, fai le tue considerazioni.

[Freesty]

Guarda posso dirti che ho parlato nel server Ds del forum e alcuni mi hanno detto di non inoculare praticamente MAI le spore direttamente nel substrato e quindi di passare da Agar o LC, altri dicevano che se facevo tutto con discrezione poteva uscire a meno che le spore non fossero contaminate.
Sincero oggi è arrivato tutto, ho provato a mettere 1-2 ml di spore (non lc) mettendole nelle buste di "riso" (metto le virgolette perchè non dico che sia condito ma ci sono Orzo, Farro, Lenticchie,fagioli e avena. Non hanno troppo sale l'unica cosa che mi spaventa e che ci sono pezzi un po' grandi) e poi 3 ml di spore nella box con substrato sterile.
Ho voluto sperimentare queste buste perchè erano le uniche "trasparenti che ho trovato".
Se consigliate qualcosa dite, in caso aggiorno tra 7 8 giorni
PS: lasciate stare le mollette, le ho dovute mettere perchè il nastro non incollava in quella superfice...
maledetti siti che non curano i pacchi il nastro microforato non c'era dentro
https://ibb.co/hFdjDGg
https://ibb.co/qk9RPJw

[asklepios]

Guarda posso dirti che ho parlato nel server Ds del forum e alcuni mi hanno detto di non inoculare praticamente MAI le spore direttamente nel substrato e quindi di passare da Agar o LC, altri dicevano che se facevo tutto con discrezione poteva uscire a meno che le spore non fossero contaminate.

LC proprio no, per i motivi che ti ho spiegato secondo me è meglio evitarla, a meno che non venga inoculata con il micelio prima pulito su agar. Inoculare con le spore direttamente il substrato non è consigliabile in quanto le spore non sono sterili, ma prima che l'agar diventasse popolare si è sempre fatto così, e le tek come Uncle Ben's sono la riprova che come metodo può funzionare. Bisogna accettare il compromesso che si avranno tassi di contaminazione più alti, e la possibilità che una siringa di spore particolarmente sporca contamini ogni singola cosa che inocula, ma come consiglio sempre basta aumentare il numero di tortine/buste per tutelarsi da questo margine di contaminazione.

3 ml di spore nella box con substrato sterile.

3 mL sono tantini, spero li abbia distribuiti bene e che non facciano ristagni. 1 mL è più che abbondante, anche meno sarebbe sufficiente. Di spore ce n'è davvero tante, è l'acqua il problema

maledetti siti che non curano i pacchi il nastro microforato non c'era dentro

Il nastro microforato lo trovi al supermercato come cerotto di carta. Se non c'è in farmacia lo hanno sicuramente. Se hai mai fatto un prelievo sai quanto è adesivo quel nastro

[Freesty]

Guarda posso dirti che ho parlato nel server Ds del forum e alcuni mi hanno detto di non inoculare praticamente MAI le spore direttamente nel substrato e quindi di passare da Agar o LC, altri dicevano che se facevo tutto con discrezione poteva uscire a meno che le spore non fossero contaminate.

LC proprio no, per i motivi che ti ho spiegato secondo me è meglio evitarla, a meno che non venga inoculata con il micelio prima pulito su agar. Inoculare con le spore direttamente il substrato non è consigliabile in quanto le spore non sono sterili, ma prima che l'agar diventasse popolare si è sempre fatto così, e le tek come Uncle Ben's sono la riprova che come metodo può funzionare. Bisogna accettare il compromesso che si avranno tassi di contaminazione più alti, e la possibilità che una siringa di spore particolarmente sporca contamini ogni singola cosa che inocula, ma come consiglio sempre basta aumentare il numero di tortine/buste per tutelarsi da questo margine di contaminazione.

3 ml di spore nella box con substrato sterile.

3 mL sono tantini, spero li abbia distribuiti bene e che non facciano ristagni. 1 mL è più che abbondante, anche meno sarebbe sufficiente. Di spore ce n'è davvero tante, è l'acqua il problema

maledetti siti che non curano i pacchi il nastro microforato non c'era dentro

Il nastro microforato lo trovi al supermercato come cerotto di carta. Se non c'è in farmacia lo hanno sicuramente. Se hai mai fatto un prelievo sai quanto è adesivo quel nastro

Avendo poca praticità ho sbagliato di poco le dosi ma non credo cambi molto. Alla fine la box é grande sono 1200 ml.
Spero di non aver sbagliato di nuovo ;(
Che dici di fare con i restanti 15 ml di spore?
Ho altre buste di riso così, se leggi sopra, per come sono fatte ho paura che siano troppo grandi i pezzi e non colonizza

Ti allego una foto di un pacco nuovo https://ibb.co/LZHyJNY

[Viaggiatore]

Guarda posso dirti che ho parlato nel server Ds del forum e alcuni mi hanno detto di non inoculare praticamente MAI le spore direttamente nel substrato e quindi di passare da Agar o LC, altri dicevano che se facevo tutto con discrezione poteva uscire a meno che le spore non fossero contaminate.
Sincero oggi è arrivato tutto, ho provato a mettere 1-2 ml di spore (non lc) mettendole nelle buste di "riso" (metto le virgolette perchè non dico che sia condito ma ci sono Orzo, Farro, Lenticchie,fagioli e avena. Non hanno troppo sale l'unica cosa che mi spaventa e che ci sono pezzi un po' grandi) e poi 3 ml di spore nella box con substrato sterile.
Ho voluto sperimentare queste buste perchè erano le uniche "trasparenti che ho trovato".
Se consigliate qualcosa dite, in caso aggiorno tra 7 8 giorni
PS: lasciate stare le mollette, le ho dovute mettere perchè il nastro non incollava in quella superfice...
maledetti siti che non curano i pacchi il nastro microforato non c'era dentro
https://ibb.co/hFdjDGg
https://ibb.co/qk9RPJw

Ti consiglio di fare così, compra del riso integrale lo fai bollire per 7 Min lo lasci freddare lo metti nei barattoli che copri con stagnola. Metti tutto in pentola a pressione per 2 h inocula 1 cl per barattolo metti adesivo traspirante sul buco fai colonizzare.

[Freesty]

Non ho una pentola a pressione sennò procedevo per fare l’agar

[Freesty]

Guarda posso dirti che ho parlato nel server Ds del forum e alcuni mi hanno detto di non inoculare praticamente MAI le spore direttamente nel substrato e quindi di passare da Agar o LC, altri dicevano che se facevo tutto con discrezione poteva uscire a meno che le spore non fossero contaminate.
Sincero oggi è arrivato tutto, ho provato a mettere 1-2 ml di spore (non lc) mettendole nelle buste di "riso" (metto le virgolette perchè non dico che sia condito ma ci sono Orzo, Farro, Lenticchie,fagioli e avena. Non hanno troppo sale l'unica cosa che mi spaventa e che ci sono pezzi un po' grandi) e poi 3 ml di spore nella box con substrato sterile.
Ho voluto sperimentare queste buste perchè erano le uniche "trasparenti che ho trovato".
Se consigliate qualcosa dite, in caso aggiorno tra 7 8 giorni
PS: lasciate stare le mollette, le ho dovute mettere perchè il nastro non incollava in quella superfice...
maledetti siti che non curano i pacchi il nastro microforato non c'era dentro
https://ibb.co/hFdjDGg
https://ibb.co/qk9RPJw

Ti consiglio di fare così, compra del riso integrale lo fai bollire per 7 Min lo lasci freddare lo metti nei barattoli che copri con stagnola. Metti tutto in pentola a pressione per 2 h inocula 1 cl per barattolo metti adesivo traspirante sul buco fai colonizzare.

Comunque sono già sterilizzate al vapore teoricamente, chiedevo se andassero bene per uncle ben

[asklepios]

Come tipo di substrato potrebbe andare ma mi sembra troppo, troppo umido, secondo me hai usato troppe spore. Se leggi la guida in wiki consiglia massimo 0,75 cc (mL), e se clicchi il link in fondo alla guida in wiki vieni rimandato alla guida originale che consiglia non più di 0,5 mL.
Visto che ti rimangono un bel po' di spore, al tuo posto farei così: acquista altre buste (io ti suggerirei una decina, non meno di 5 per andare sul sicuro), del cerotto di carta in farmacia/supermercato (deve essere il più largo possibile per facilitarti il lavoro), quindi leggi la guida dall'inizio alla fine, guarda i video che ci sono nella guida originale linkata alla fine della guida in wiki, e quando sei sicuro di aver capito ogni dettaglio ripeti il procedimento con le nuove buste. Puoi anche usare buste non trasparenti, e cercare di capire al tatto a che punto è la colonizzazione. Il substrato colonizzato diventa duro e compatto

Ovviamente come ti hanno scritto se avessi una pentola a pressione potresti seguire altre tecniche e prepare tu stesso il substrato. Il problema è che la maggior parte delle persone non ha una pentola a pressione grande abbastanza per accomodare un paio di barattoli al suo interno.

[Freesty]

Quello in foto non aveva neanche le spore dentro… buh provo ad inoculare quelle rimanenti e vedo con meno come si comporta il substrato

[asklepios]

In tal caso forse è meglio cercare una marca alternativa. Se non trovi delle buste adatte puoi sempre fare la PFTek

[Freesty]

In tal caso forse è meglio cercare una marca alternativa. Se non trovi delle buste adatte puoi sempre fare la PFTek

Come faccio a regolarmi sul giusto quantitativo di umidità per una busta?

[asklepios]

Non devi vedere acqua in giro all'interno, tutta l'acqua deve essere all'interno dei grani (idealmente). Più acqua c'è, peggio è. Se non hai alternative vale la pena provare comunque, usa solo un paio di gocce di spore per busta

[Freesty]

Aggiorno così magari qualcuno interessato o @asklepios riesce a dirmi cosa succede.
(Non volevo creare 300 3d per questo scrivo qua)

8 giorni fa ho inoculato 8 buste per uncle ben e una box partendo da una siringa di spore.
A differenza dell’altra volta ho chiuso tutte le buste e la box in una scatola sterilizzata facendo circolare regolarmente l’aria.
Oggi dopo 8 giorni ancora non vedo nulla, solo 1 delle buste di riso sembra un minimo più solida al tatto, questo é molto strano dato che ho usato quelle buste mezze annacquate ahahah.
Speravo che sarebbe uscito qualcosa solo nella box sinceramente.
Premetto che aprivo solo quando saliva troppo la temperatura tipo a 29 gradi, per il resto sempre stati sui 24.
Allego le foto
https://ibb.co/zX64HTh
https://ibb.co/gdSxFmd
https://ibb.co/b6GN1Kg
https://ibb.co/fGCTfHB

A me sembrano tutti uguali quindi in caso della stessa umidità perché solo 1 é più compatto al tatto. Là box non l’ho nemmeno fotografata dato che non si vede assolutamente nulla… buh sinceramente sono un po’ deluso
L’unico cambiamento é il cambio di temperatura nella scatola negli ultimi giorni, dalla quale esce un po’ di calore e ho notato anche un rigonfiamento in qualche busta, come un uscita di gas

Mi sono ancora rimasti 5 ml di spore comunque, che me ne faccio senza pentola a pressione?

[Nεctar]

ciao Freesty aspetta comunque la risposta di asklepios che potrebbe non essere d'accordo con me.

non ho mai fatto uncle ben's.

per quanto riguarda il substrato già pronto sono andato a vedere sul sito del venditore e dice di iniettare 10-25 ml di coltura liquida o di soluzione di spore, e se è lo stesso substrato dell'altra volta era quello che hai fatto tu.

avevi aggiunto l'acqua che non dovevi aggiungere. però a mio parere aggiungere acqua del rubinetto (che ok non è tecnicamente sterile, ma io dubito che possa portare realisticamente a contaminazioni) l'unico problema che poteva creare era di dare umidità eccessiva e rallentare la crescita del micelio o favorire contaminazioni secondarie.

riguardo all'uso di una still-air box, una still-air box fatta in casa senza sistemi di filtrazione dell'aria veri e propri può portarti a ridurre le contaminazioni di un 30% se fai le cose in modo pulitissimo, quindi secondo me non fa molta differenza.

c'è molto "odio" nei confronti dei kit e dei substrati già pronti, soprattutto partito da shroomery, ma secondo me per una persona che è alla sua prima volta con un substrato già pronto è più facile, e non si spende neanche tanto di più rispetto a comprare tutto separatamente e dover sterilizzare tutto da soli con il dubbio di non farlo bene.

se questa volta hai usato il substrato già pronto come da istruzioni mettendo 10 ml di soluzione di spore e non bagnandolo, non è che il problema potrebbe essere proprio la soluzione di spore?
è raro vedere 2 prove di fila in cui le spore non germinano neanche

[Freesty]

Ciao N3ctar

Il mio substrato rispetto a “quello dell’altra volta” che non ho capito bene quale intendi, non é stato lasciato con l’acqua, ma era già sterile e neanche da attivare dato che gli ho messo io le spore da germinare.
Ho fatto tutto nella SAB tentando di evitare le contaminazioni. Il mio dubbio é che, dopo 8 giorni dovevo iniziare a vedere qualcosa ma nada. Se avessi messo 10 ml di spore avrei creato troppa umidità e non sarebbe venuto nulla. Proprio @asklepios mi ha detto di mettere 1/2 ml che vanno più che bene. E 1 ml solo nelle buste di riso.
Procederò successivamente a prenderne una già colonizzata ma volevo capire cosa ho sbagliato adesso e, se nel caso devo buttare tutto dato che vorrei tenere casa il più possibile pulita

[Nεctar]

penso che 1/2 ml non si riferisse al substrato già pronto a base di avena. visto che il venditore dice di usare 10 ml penso che ci sia un motivo, poi non so. io per inoculare la segale usavo 5 ml e non c'erano problemi di umidità.
l'altra volta più che il fatto di usare 10 ml era successo che avevi versato l'acqua nel substrato

*quando dico l'altra volta parlo di quando avevi preso un substrato già pronto senza istruzioni e ci avevi aggiunto acqua del rubinetto