Clonaggio con Agar

[pannocchietta]

Ciao.
Ho effettuato un tissue transfer su agar.
E ora cosa ci posso fare?
Vediamo se ho capito..
A) conservazione del ceppo in frigo (mesi-anni?)
B) grain jar-> tanti grain jar (o un bel grain bag)-> monotub

E' corretto?

[Salvo98]

potresti anche invertirlo a lc usando un pezzettino di agar colonizzato

[M&M]

Da quel che dice Sam quella coltura su agar non sarà completamente pulita dai contaminanti,perciò dovresti fare un paio di passagiorni su agar per renderla pulita;dopodiché IO userei un pezzettino di agar per produrre una coltura liquida pulita per poi inoculare sui cereali. Ma non so se è la strada giusta da percorrere,questo è quello che farei io, ma Sam è molto più esperto di me,avrei bisogno anche io di fargli un paio di domande,ma paté sparito nel nulla ò.ò

[Salvo98]

Da quel che dice Sam quella coltura su agar non sarà completamente pulita dai contaminanti,perciò dovresti fare un paio di passagiorni su agar per renderla pulita;dopodiché IO userei un pezzettino di agar per produrre una coltura liquida pulita per poi inoculare sui cereali. Ma non so se è la strada giusta da percorrere,questo è quello che farei io, ma Sam è molto più esperto di me,avrei bisogno anche io di fargli un paio di domande,ma paté sparito nel nulla ò.ò

ma zibibbo è già partito dal tessuto di un fungo,non dovrebbe essere già una monocoltura?comunque è propio sparito sam,ho un paio di domande in sospeso anche io da dirgli

[M&M]

Il fatto che è partito dal tessuto di un fungo,comporta,molto probabilmente che insieme al tessuto ha trasportato anche agenti contaminanti (batteri/lieviti/muffe) da qui "coltura sporca" . I vari passaggi su agar servono per eliminare i contaminanti e non per ottenere una monocoltura,cosa che come dici,ha già ottenuto in quanto è partito dal tessuto di un fungo e non da spore

[pannocchietta]

Ho appena eseguito la prima "pulitura".
Sono sicuro di stare coltivando una contaminazione (credo una muffa o un lievito) perchè la coltura del presunto P.cubensis NON è affatto rizomorfica. Appare di un bianco denso/omogeneo/cremoso (tipo yogurt).

[M&M]

Foto?

[pannocchietta]

Hai ragione. Mi vergogno quasi a dirlo ma sto usando barattoli di vetro al posto dei petri e è praticamente impossibile fare una foto accurata (e, ovviamente, non posso nemmeno aprirli).
Comunque vedo se riesco. Se le foto sono sensate le posto.

[Salvo98]

zibibbo,se mi dai il permesso vorrei provare a mettere a confronto le nostre due propagazioni su agar,sempre se a te và bene .Più che altro sono partito da delle spore su agar e ho fatto già una prima selezione,è solo che non sò come riconoscere un micelio rizomorfico

[pannocchietta]

Salvo ne so quanto te.
Il P. cubensis, se ho capito bene, tende ad essere molto rizomorfico. Per capire di cosa sto parlando digita Psilocybe cubensis agar su google immagini. Le colture hanno un motivo a "radice d'albero" più o meno evidente.
Per confronto intendi con le foto?

[M&M]

Zib non tutti i miceli di cubensis sono rizomorfi però,può capitare di trovarne uno come può succedere il contrario,un micelio rizomorfo è un micelio "più aggressivo"

[pannocchietta]

Comunque per testare che sia micelio potrei prenderne un pezzetto, accrescerlo altrove e metterlo in condizioni fruttificanti. No?

[Salvo98]

Salvo ne so quanto te.
Il P. cubensis, se ho capito bene, tende ad essere molto rizomorfico. Per capire di cosa sto parlando digita Psilocybe cubensis agar su google immagini. Le colture hanno un motivo a "radice d'albero" più o meno evidente.
Per confronto intendi con le foto?

sì intendo con foto,magari tra una settimana visto che ho fatto il trasferimento appena da ieri

[M⊙nad]

Se e' bianco e omogeneo e' probabilmente micelio. Fai un'altra pulitura, selezionando solo un pezzettino e vedi un po' che succede.

[pannocchietta]

Ho fatto 1 sola subcultura, ovvero: fungo->trasferimento su agar-> trasferimento su nuovo agar.
Potrebbe andare?

[spiritualconnection]

Ma la foto ?

[M⊙nad]

Io ne farei un altro paio, vedrai che poi il micelio rizomorfo comparira'.

Per chiarire, hai usato delle spore o un pezzetto di fungo? Per selezionare un solo genoma da delle spore bisogna fare molti passaggi.